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Western Blot條帶總對(duì)不齊?可能選錯(cuò)了蛋白Marker
  • 發(fā)布日期:2025-10-28      瀏覽次數(shù):364
    • 非預(yù)染蛋白Marker在電泳過(guò)程中看不到,電泳結(jié)束后經(jīng)過(guò)蛋白染色后才能起指示作用,無(wú)法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中起預(yù)示作用。

      但是由于蛋白沒(méi)有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準(zhǔn)確。你的Western Blot條帶總對(duì)不齊?可能是第一步就選錯(cuò)了蛋白Marker!

      蛋白Marker主要分為未預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker兩種,另外還有一些其他類型的蛋白Marker:如顯影蛋白Marker等。

       

      未預(yù)染蛋白Marker

      非預(yù)染蛋白Marker在電泳過(guò)程中看不到,電泳結(jié)束后經(jīng)過(guò)蛋白染色后才能起指示作用,無(wú)法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中起預(yù)示作用。但是由于蛋白沒(méi)有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準(zhǔn)確。

       

      預(yù)染蛋白Marker

      是純化好的幾種蛋白,通過(guò)與染料共價(jià)耦聯(lián)后混合在一起,在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到的一種蛋白Marker。

      預(yù)染蛋白Marker又可分為單色預(yù)染和多色預(yù)染。

      Marker條帶越多參考價(jià)值越大,同時(shí)也越難區(qū)分,若用不同顏色則容易辨認(rèn);單色的Marker通常利用其中某些條帶加倍濃度來(lái)提示其大小。

      預(yù)染蛋白Marker在電泳過(guò)程可以起到預(yù)示作用,當(dāng)觀察目標(biāo)蛋白大小位置進(jìn)入最佳分辨區(qū)時(shí),停止電泳,以得到最佳分辨效果。

      轉(zhuǎn)膜過(guò)程可以監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)膜效率,同時(shí)可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量。

      但是,預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)偶聯(lián),在不同的緩沖條件下,電泳遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化,導(dǎo)致一些偏差。

      也就是說(shuō),預(yù)染蛋白Marker條帶代表的是相對(duì)大小,而不是絕對(duì)大小。

       

      顯影蛋白Marker
      顯影蛋白Marker,蛋白條帶中含有IgG結(jié)合位點(diǎn),IgG結(jié)合位點(diǎn)會(huì)結(jié)合用于檢測(cè)靶蛋白的一抗或二抗,使得蛋白Marker在印跡膜上可與目的條帶一同呈現(xiàn)。

      通常會(huì)有兩個(gè)預(yù)染條帶,便于動(dòng)態(tài)觀察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài),判斷轉(zhuǎn)膜效果和方向;結(jié)合抗體后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)可顯示多個(gè)條帶。

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